Жаңа коронавирус (SARS-Cov-2) нуклеин қышқылын анықтау жинағы
New Coronavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Fluкенscent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【Product name 】Жаңа коронавирус (SARS-Cov-2) нуклеин қышқылын анықтау жинағы (флуоресцентті RT-ПТР зонд әдісі)
【Packaging specifications 】25 сынақ/жинақ
【Intended usжасы】
Бұл жинақ мұрын-жұтқыншақ жағындыларында, ауыз-жұтқыншақ (тамақ) жағындыларында, алдыңғы мұрын жағындыларында, ортаңғы турбиналық жағындыларда, мұрын жууларында және олардың денсаулық сақтау провайдері COVID19-ға күдіктенген тұлғалардың мұрын аспирацияларында жаңа коронавирустан нуклеин қышқылын сапалы анықтау үшін қолданылады. Жаңа коронавирустың ORF1ab және N гендерін анықтау жаңа коронавирустық инфекцияның қосалқы диагностикасы және эпидемиологиялық мониторингі үшін пайдаланылуы мүмкін.
【Principles of the pжүгіруdure 】
Бұл жинақ арнайы TaqMan зондтары мен жаңа коронавирус (SARS-Cov-2) ORF1ab және N гендерінің реттілігіне арналған арнайы праймерлерге арналған. ПТР реакциясының ерітіндісінде нысаналарды нақты анықтауға арналған арнайы праймерлердің және флуоресцентті зондтардың 3 жиынтығы бар, сонымен қатар арнайы праймерлердің және флуоресцентті зондтардың қосымша жинағы эндогендік шаруашылық гендерін анықтауға арналған жинақтың ішкі стандартты бақылауы ретінде пайдаланылады.
Сынақ принципі мынада: нақты флуоресцентті зонд ПТР реакциясындағы Taq ферментінің экзонуклеаза белсенділігі арқылы қорытылады және ыдырайды, осылайша репортер флуоресценттік топ пен сөндірілген флуоресцентті топ бөлінеді, осылайша флуоресцентті бақылау жүйесі флуоресцентті қабылдай алады. сигнал, содан кейін ПТР күшейтудің байыту әсері арқылы зондтың флуоресценция сигналы белгіленген шекті мәнге-Ct мәніне жетеді (Цикл шегі). Мақсатты ампликон болмаған жағдайда зондтың репортер тобы сөндіру тобына жақын болады. Осы уақытта флуоресцентті резонанстық энергияның берілуі орын алады және репортер тобының флуоресценциясы сөндіру тобымен сөндіріледі, осылайша флуоресцентті сигнал флуоресцентті ПТР құралы арқылы анықталмайды.
Сынақ кезінде реагенттерді пайдалануды бақылау үшін жиынтық оң және теріс бақылау құралдарымен жабдықталған: оң бақылауда мақсатты учаскенің рекомбинантты плазмидасы бар, ал теріс бақылауда қоршаған ортаның ластануын бақылау үшін қолданылатын тазартылған су. Тестілеу кезінде оң бақылау мен теріс бақылауды бір уақытта орнату ұсынылады.
【Main comпоненts 】
| Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | Құрамдасents | |
| Намe | спецфикация | Саныity | Саныity | |
| Оң бақылау | 180 мкл/құты | 1 | 1 | Жасанды түрде жасалған плазмидалар, тазартылған су |
| Теріс бақылау | 180 мкл/құты | 1 | 1 | Дистилденген су |
| SARS-Cov-2 қоспасы | 358,5 мкл/құты | 1 | / | Арнайы праймер жұптары, спецификалық анықтау флуоресцентті зондтар, dNTPs, , MgCl2, KCl, Tris-Hcl, тазартылған су және т.б. |
| Фермент қоспасы | 16,5 мкл/құты | 1 | / | Taq ферменттері, кері транскриптаза, UNG ферменттері және т.б. |
| SARS-Cov-2 қоспасы (лиофилденген) | 25 сынақ/құты | / | 1 | Арнайы праймер жұптары, спецификалық анықтау флуоресцентті зондтары, dNTPs, Taq ферменттері, кері транскриптаза, тазартылған су және т.б. |
| 2x буфер | 375 мкл/құты | / | 1 | MgCl2, KCl, Tris-Hcl, тазартылған су және т.б. |
Ескерту:(1) Әртүрлі топтамалардағы құрамдастарды араластыру немесе ауыстыру мүмкін емес.
(2) Өз реагентіңізді дайындаңыз: Нуклеин қышқылын алу жинағы.
【Storage conditions және expiration date 】
For BST-SARS-25:Ұзақ уақыт бойы -20±5℃ температурада тасымалдаңыз және сақтаңыз.
For BST-SARS-DR-25:Бөлме температурасында тасымалдау. -20±5℃ температурада ұзақ уақыт сақтаңыз.
Қайталанатын мұздату-еріту циклдарынан аулақ болыңыз. Жарамдылық мерзімі алдын ала 12 айға белгіленген.
Өндірілген және пайдаланылған күнін жапсырмадан қараңыз.
Алғашқы ашылғаннан кейін реагентті мұздату-еріту циклдарының қайталануын және реагенттің қатып қалу санын болдырмау үшін 1 айдан аспайтын уақытқа немесе реагент мерзімінің соңына дейін (қай күн бірінші келгеніне қарамастан) сақтауға болады. -еріту циклдары 6 реттен аспауы керек.
【Applicable instrument】ABI 7500, SLAN-96P, Roche-LightCycler-480.
【Sample requirements 】
1. Қолданылатын үлгі түрі: Экстракцияланған нуклеин қышқылы ерітіндісі.
2. Үлгіні сақтау және тасымалдау: -20±5℃ температурада 6 ай бойы сақтаңыз. Үлгілерді 6 реттен артық емес мұздатып, ерітіңіз.
【TОңтүстік Америка шығыс бөлігінің стандартты уақытыing method】
1.Nucleic acid extraction
Вирустық нуклеин қышқылын алу үшін сәйкес нуклеин қышқылын экстракциялау жинағын таңдап, сәйкес жинақ нұсқауларын орындаңыз. Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co., Ltd. шығарған нуклеин қышқылын экстракциялау және тазарту жинағын немесе нуклеин қышқылын тазарту жинағын пайдалану ұсынылады.
2. Reaction режnt prepараtion
2.1 For BST-SARS-25:
(1) SARS-Cov-2 қоспасын және фермент қоспасын алып тастаңыз, бөлме температурасында Vortex құрылғысымен мұқият ерітіңіз, содан кейін қысқа центрифугалаңыз.
(2) 358,5 uL SARS-Cov-2 қоспасына 16,5 мл фермент қоспасы қосылып, аралас реакция ерітіндісін алу үшін мұқият араластырылды.
(3) Таза 0,2 мл ПТР сегіздік түтікшені дайындаңыз және оны әр ұңғымаға жоғарыда аталған аралас реакция ерітіндісінің 15 uL мөлшерімен белгілеңіз.
(4) 15 мкл тазартылған нуклеин қышқылы ерітіндісін, оң бақылауды және теріс бақылауды қосып, сегіздік түтік қақпағын мұқият жабыңыз.
(5) Төңкеру арқылы жақсылап араластырыңыз және сұйықтықты түтік түбінде шоғырландыру үшін жылдам центрифугалаңыз.
1
2.2 For BST-SARS-DR-25:
(1) Реакция қоспасын дайындау үшін SARS-Cov-2 қоспасына((лиофилденген) 375ул 2х буфер қосыңыз. Тамшуыр арқылы мұқият араластырыңыз, содан кейін қысқа центрифугалаңыз. （Реакция қоспасы дайындалғаннан кейін оны -20°C температурада сақтау ұсынылады. ұзақ мерзімді сақтау.)
(2) Таза 0,2 мл ПТР сегіздік түтігін дайындаңыз және оны әр ұңғымаға 15 мкл реакциялық қоспамен белгілеңіз.
(3) 15 мкл тазартылған нуклеин қышқылы ерітіндісін, оң бақылауды және теріс бақылауды қосып, сегіздік түтік қақпағын мұқият жабыңыз.
(4) Төңкеру арқылы жақсылап араластырыңыз және сұйықтықты түтіктің түбінде шоғырландыру үшін жылдам центрифугалаңыз.
3. ПТР amplification （Жұмыс параметрлері үшін құрал нұсқаулығын қараңыз.）
3. 1 ПТР 8 түтігін флуоресцентті ПТР құралының үлгі камерасына салыңыз және сыналатын үлгіні, оң бақылау мен теріс бақылауды жүктеу тәртібіне сәйкес орнатыңыз.
3.2 Флуоресценцияны анықтау арнасы:
(1) ORF1ab гені FAM анықтау арнасын таңдайды (Репортер: FAM, Quencher: жоқ).
(2) N гені VIC анықтау арнасын таңдайды (Репортер: VIC, Quencher: Жоқ).
(3) Ішкі стандартты ген CY5 анықтау арнасын таңдайды (Репортер: CY5, Quencher: Жоқ).
(4) Пассивті сілтеме ROX күйіне орнатылған.
3.3 ПТР бағдарламасының параметрін орнату:
| Қадам | Температура(℃) | Уақыт | Циклдар саны | |
| 1 | Кері транскрипция реакциясы | 50 | 15 мин | 1 |
| 2 | Taq ферментінің активтенуі | 95 | 2,5 мин | 1 |
| 3 | Taq ферментінің активтенуі | 93 | 10 с | 43 |
| Күйдіру ұзарту және флуоресценция алу | 55 | 30 с | ||
Орнатқаннан кейін файлды сақтаңыз және реакция бағдарламасын іске қосыңыз.
4.Results analysis
Бағдарлама аяқталғаннан кейін нәтижелер автоматты түрде сақталады және күшейту қисығы талданады. Күшейтудің қисығы аспаптың әдепкі шегіне орнатылады.
【Explanation of test results 】
1. Тәжірибенің жарамдылығын анықтаңыз: оң бақылау FAM, VIC арнасының типтік күшейту қисығы болуы керек, ал Ct мәні әдетте 34-тен төмен, бірақ әртүрлі құралдардың әртүрлі шекті параметрлеріне байланысты ауытқуы мүмкін. Теріс басқару FAM, VIC арнасы күшейтілмеген Ct болуы керек. Жоғарыда аталған талаптар бір уақытта орындалуы керек деп келісілді, әйтпесе бұл сынақ жарамсыз болып табылады.
2. Нәтиже туралы шешім
| FAM/VIC арнасы | Сот нәтижесі |
| Ct＜37 | Үлгі сынағы оң |
| 37≤Ct＜40 | Күшейтудің қисығы S-тәрізді, күдікті үлгілерді қайта қарау қажет; егер қайталама емтиханның нәтижелері сәйкес болса, ол оң, әйтпесе теріс деп бағаланады |
| Ct≥40 немесе күшейту жоқ | Үлгі сынағы теріс (немесе жинақты анықтаудың төменгі шегінен төмен) |
Ескертпе: ( 1) FAM арнасы да, VIC арнасы да бір уақытта оң болса, SARS-Cov-2 оң деп анықталады.
(2) FAM арнасы немесе VIC арнасы оң болса және басқа арна теріс болса, сынақты қайталау керек. Егер ол бір уақытта оң болса, ол SARS-Cov-2 оң деп бағаланады, әйтпесе SARS-Cov-2 теріс деп бағаланады.
Қатысты өнімдер
-
COVID-19 IgM/IgG антиденелерін анықтау жинағы
COVID-19 IgM/IgG антиденелерін анықтау жинағы （Коллоидтық алтын иммунохроматография әдісі) Өнім нұсқаулығы 【ӨНІМ АТАУЫ】COVID-19 IgM/IgG антиденелерін анықтау жинағы (коллоидтық алтын иммунохроматография әдісі) 【PECKAGs/SPECKAGs сынағы бұл 【 ТҮЙІН】 Жаңа коронавирустар β тұқымдасына жатады. COVID-19 – жіті респираторлық инфекциялық ауру. Адамдар әдетте сезімтал. Қазіргі уақытта жаңа коронавирусты жұқтырған науқастар негізгі көз ...
-
Нуклеин қышқылын алу немесе тазарту жинағы
Нуклеин қышқылын алу немесе тазарту жинағы немесе -20℃ температурада сақталады. Үлгіні 0℃ бұйралау арқылы тасымалдау керек. Кіріспе Нуклеин қышқылын экстракциялау немесе тазарту жинағы (магниттік моншақтар әдісі) автоматтандырылған нуклеин қышқылын экстракциялау құралдарын пайдалана отырып, дене сұйықтықтарынан (мысалы, тампондар, плазма, сарысу) РНҚ мен ДНҚ-ны автоматтандырылған тазалауға арналған. Магниттік-бөлшектік технология жоғары сапалы ДНҚ/РНҚ береді, ол ...
-
SARS-CoV-2 антигенді талдау жинағы (иммунохроматогр...
SARS-CoV-2 антиген талдау жинағы (Иммунохроматография әдісі) Өнім нұсқаулығы 【ӨНІМ АТАУЫ】SARS-CoV-2 антигенді талдау жинағы (Иммунохроматография әдісі) 【ОРАМА СИПАТТАМАСЫ】 1 сынама/жинақ coronavirus 【ABSTR геніне жатады. COVID-19 – жіті респираторлық инфекциялық ауру. Адамдар әдетте сезімтал. Қазіргі уақытта жаңа коронавирусты жұқтырған науқастар негізгі...
-
SARS-CoV-2 антигенді талдау жинағы
SARS-CoV-2 антигенін талдау жинағы (Иммунохроматография әдісі) Өнім нұсқаулығы 【ӨНІМ АТАУЫ】SARS-CoV-2 антигенді талдау жинағы (Имунохроматография әдісі) 【ОРАМА ЕРЕКШЕЛІКТЕРІ】 1 сынақ/жинақ, 25TRABTests, 】 The Жаңа коронавирустар β тұқымдасына жатады. COVID-19 – жіті респираторлық инфекциялық ауру. Адамдар әдетте сезімтал. Қазіргі уақытта жаңа коронавирусты жұқтырған науқастар инфекцияның негізгі көзі болып табылады; асимптоматикалық жұқтырған адамдар...